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“T4多聚核苷酸激酶”参数说明
| 类别： | 分子生物学工具酶 | 用途1： | 5’末端磷酸化 |
| 用途3： | DNA或rna探针的末端标记 | 用途2： | 去除3′磷酸基团 |
“T4多聚核苷酸激酶”详细介绍
概述：
T4多聚核苷酸激酶能够催化磷酸基团在ATP的γ-位和寡核苷酸链 (双链或单链DNA或RNA) 的5′-羟基末端以及3′-单磷酸核苷间进行转移和交换。该酶还具有3′磷酸酶活性，将3′-磷酸基团从寡核苷酸的3′磷酸末端、脱氧3′-单磷酸核苷和脱氧3′-二磷酸核苷上水解掉。
来源：
重组E. coli菌株，克隆有T4多聚核苷酸激酶基因(1)。
应用：
1. DNA或RNA的5′末端磷酸化，以便进行连接反应。
2. DNA或RNA探针的末端标记，进行DNA测序(2)。
3. 去除核苷酸等的3′磷酸基团(3)。
反应条件：
1× T4多聚核苷酸激酶反应体系含：1× T4多聚核苷酸激酶反应缓冲液 [70 mM Tris-HCl (pH 7.6 @ 25°C)，10 mM MgCl2，5 mM DTT]，37°C温育。
质量检测:
核酸外切酶活性：50 μl反应体系中，300 U本酶与1 μg的Hind III消化的λDNA于37°C温育4小时，电泳条带无明显变化。
核酸内切酶活性：50 μl反应体系中，200 U本酶与1 μg的pUC19质粒于37°C温育4小时，<10%的pUC19质粒由超螺旋变为缺刻状态。
RNase活性：50 μl反应体系中，100 U本酶与250 ng的大肠杆菌rRNA于37°C温育2小时，经琼脂糖电泳检测，被降解的rRNA小于1%。
其他酶活性：50 μl反应体系中，50 U本酶在37°C条件下与5′羟基末端磷酸化的d(T)8反应，经BIOMOL GreenTM试剂显色后分光光度计检测，少于1%的产物被磷酸酶降解。
纯度：经SDS-PAGE (考马斯亮蓝染色) 检测其纯度大于95%。
质保声明：
T4多聚核苷酸激酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。
单位定义：
1单位即1个Richardson单位，指37°C条件下，30分钟内催化1 nmol酸不溶性[32P]掺入所需要的酶量(1) 。
参考文献:
1. Richardson, C.C. (1981). P.D. Boyer (Eds.), The Enzymes, Vol. 14, (pp. 299-314). San Diego: Academic Press.
2. Sambrook, J. et al. (1989). Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (2nd ed.), (pp 10.59-10.67, 11.31-11.33). Cold Spring Harbor: Cold Spring Harbor Laboratory Press.
3. Cameron, V. and Uhlenbeck, O.C. (1977). Biochemistry, 16, 5120-5126.
4. Berkner, K.L. and Folk, W.R. (1977) J. Biol. Chem., 252, 3176-3184.
T4多聚核苷酸激酶能够催化磷酸基团在ATP的γ-位和寡核苷酸链 (双链或单链DNA或RNA) 的5′-羟基末端以及3′-单磷酸核苷间进行转移和交换。该酶还具有3′磷酸酶活性，将3′-磷酸基团从寡核苷酸的3′磷酸末端、脱氧3′-单磷酸核苷和脱氧3′-二磷酸核苷上水解掉。
来源：
重组E. coli菌株，克隆有T4多聚核苷酸激酶基因(1)。
应用：
1. DNA或RNA的5′末端磷酸化，以便进行连接反应。
2. DNA或RNA探针的末端标记，进行DNA测序(2)。
3. 去除核苷酸等的3′磷酸基团(3)。
反应条件：
1× T4多聚核苷酸激酶反应体系含：1× T4多聚核苷酸激酶反应缓冲液 [70 mM Tris-HCl (pH 7.6 @ 25°C)，10 mM MgCl2，5 mM DTT]，37°C温育。
质量检测:
核酸外切酶活性：50 μl反应体系中，300 U本酶与1 μg的Hind III消化的λDNA于37°C温育4小时，电泳条带无明显变化。
核酸内切酶活性：50 μl反应体系中，200 U本酶与1 μg的pUC19质粒于37°C温育4小时，<10%的pUC19质粒由超螺旋变为缺刻状态。
RNase活性：50 μl反应体系中，100 U本酶与250 ng的大肠杆菌rRNA于37°C温育2小时，经琼脂糖电泳检测，被降解的rRNA小于1%。
其他酶活性：50 μl反应体系中，50 U本酶在37°C条件下与5′羟基末端磷酸化的d(T)8反应，经BIOMOL GreenTM试剂显色后分光光度计检测，少于1%的产物被磷酸酶降解。
纯度：经SDS-PAGE (考马斯亮蓝染色) 检测其纯度大于95%。
质保声明：
T4多聚核苷酸激酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。
单位定义：
1单位即1个Richardson单位，指37°C条件下，30分钟内催化1 nmol酸不溶性[32P]掺入所需要的酶量(1) 。
参考文献:
1. Richardson, C.C. (1981). P.D. Boyer (Eds.), The Enzymes, Vol. 14, (pp. 299-314). San Diego: Academic Press.
2. Sambrook, J. et al. (1989). Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (2nd ed.), (pp 10.59-10.67, 11.31-11.33). Cold Spring Harbor: Cold Spring Harbor Laboratory Press.
3. Cameron, V. and Uhlenbeck, O.C. (1977). Biochemistry, 16, 5120-5126.
4. Berkner, K.L. and Folk, W.R. (1977) J. Biol. Chem., 252, 3176-3184.
